Reseptör Tahrip Fazı

Reseptör Tahrip Fazı
Eritrositlerden virusun ayrılmasında bir tek viral enzim rol oynar. Aynı virus ile hücreler, elüsyona uğrayabilir.Bu elüte edici virus paartikülleri yin eeritrositleri aglutine edebilir. Adsorbsiyon ve hemaglütinasyon en iyi 40 de görülür ve daha yüksek sıcaklıkta özellikle 370 C de enzimatik aktivite artacağından elüsyon daha hızlı olur. Elüsyon ve enzimatik aktivitenin hızlı olması virustan virusa değişmektedir.

Kırmızı hücre reseptörleri N-asetil neuraminik asit(NANA) ve polipeptitler, oligosakkaritler ile kompleks oluşturmuş şekildedir. Nana ve diğer küçük molekül ağırlıklı amino şekerlerin kompleksleri, nöraminidaz adı verilen viral enzimin etkisi ile ayrılır (71)

Hemaglütinasyon yapan virüslarla enfekte olmuş kişilerin serumlarında virusun hemaglutinasyon yapma özelliğini engelleyen antikorlar meydana gelir. Bu özellikten yararlanarak, hemaglütinasyon yapan viruslarla enfekte olmuş şahıslarda hastalık tanısı koymak amacı ile hemaglütinasyon önlenim testinden yararlanılır. Hemaglütinasyonu önlenen antikorlar, aynı zamanda nötralizan antikorlardır. Hemaglütinasyon ve nötralizasyon testleri, eşit duyarlılığa sahiptir (47,57)

Virus nötralizasyon testi kopmlike bir test olmasına rağmen hemaglütinasyon önlenim testinin uygulanışı daha kolay ve pratiktir. Kompleman birleşmesi testinden daha fazla ancak ELISA’dan daha az duyarlı olduğu bildirilmiştir.(14,57)

Çoğu virus hemagllütininlerin etkisi, spesifik antikor dışında birçok faktörler tarafından da, nonspesifik olarak inhibe edilmektedir. Serumdaki bu nonspesifik inhibitörlerin varlığı, hemaglutinasyon önlenim testinin duyarlılığını azaltmaktadır. (15,67,76). Bu nedenle nonspesifik inhibitörlerin ortadan kaldırılması gerekir(39,100)

Serumlarda bulunan bu nonspesifik inhibitörlerin bir kısmı ısıya dayanıksızdır.Serumların 560 de 30 dakika ısıtılmasıyla ortadan kaldırılabilmektedir. (32,42,47,73).

Isıya dirençli nonspesifik inhibitörler ise Vibrio cholerae kültür süzüntülerinden elde edilen Reseptör Tahrip Edici Enzim (RDE),tripsin,heparin,MnCl2, CO2, periodat, kaolin veya bunların kombinasyonu ile ortadan kaldırılabilir. (4,25,42,82,94,99,100)

Aynı serumda bulunan heterofil antikorlar için de eritrosit ile absorbsiyon işlemi uygulanır. Eritrosit absorbsiyonu için % 50 eritrosit süspapnsiyonunun 0,1 ml.si ile serum 40C de 1 saat tutulur. Daha sonra santrifüj edilir(39,47).

Schnidt, Lennette ve King (66), nonspesifik inhibitörlerin ortadan kaldırılmasında, pseudomonas filtratlarının kaolinde daha etkili olduğunu bildirmişlerdir.

Albrecht ve arkadaşları (4) 1981 yılında yaptıkları bir çalışmada Mumps virus antikorlarının saptanmasında hemaglutinasyon önlenim testinin yüksek derecede spesifik ve duyarlı olduğunu belirtmişlerdir. Ayrıca bu araştırıcılar Mumps antijen ve antikoru arasındaki reaksiyonu güçlendirmak için,insan IgG sine karşı tavşandan elde ettikleri heterolog antikoru kullanmışlardır.

Seropozitifliği ve serokonversiyonu saptamak üzere, hemaglutinasyon önlenim testi oldukça yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak bu test, total antikor düzeyini belirleyebilen bir testtir ve bu testin kullanımı sırasında IgM antikorlarının saptanması için farklı yöntemlere gereksinim vardır.(64)

Ancak Albrecht ve arkadaşları yaptıkları çalışmalarda insan IgG sine karşı kullandıkları Anti IgG nin uygun olarak kullanılması ile,IgG ve IgM’nin ölçümünün de yapılabileceğini göstermişlerdir(4).

Nonspesifik inhibütörler ve nonspesifik hemaglutininlerden arındırılmış serum kullanılarak yapılan hemaglutinasyon önlenim testi ile güvenilir sonuç alınmaktadır.

Hemaglütinasyon önlenim testi daha önce de belirtildiği gibi, hemaglutinin içeren viruslerle uygulanabilmektedir. Adenoviruslar, Enteroviruslar, Reoviruslar, Myxoviruslar, Poxviruslar ve bazı hayvan virusları için bu testten yararlanılabilmektedir (34,47).

Hemaglutinasyon önlenim testinde antijen hazırlamak için virus, embriyonlu yumurta ve doku kültüründe üretilmektedir. Virusun hemaglutinasyon yapabilmesi için ortamda en az 104 -105 virus partikülü bulunmalıdır.

Hemaglutinasyon testinde kullanılan viral antijen Tween 80 ve eter ile yapılan işleme alınıp test uygulandığında, antikor titresinde iki kat artış gözlenmiştir. (7) Bu işlem ile virusun hemaglütinin subünitleri açığa çıkmaktadır. Mumps virus hemaglütininleri nukleokapsisi çevreleyen zarfta lokalize olmuştur. Tween 80 ve eter ile yapılan işlem lipit zarfı çözmekte ve hemaglütininlerin ortaya çıkmasına yol açmaktadır.